人糖原磷酸化酶同工酶BBELISA檢測(cè)試劑盒　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
　　　　GP-BB試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知GP-BB濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將GP-BB和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中GP-BB的濃度呈比例關(guān)系。
　　
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人糖原磷酸化酶同工酶BBELISA檢測(cè)試劑盒　

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人糖原磷酸化酶同工酶BBELISA檢測(cè)試劑盒　

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人糖原磷酸化酶同工酶BBELISA檢測(cè)試劑盒　

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的GP-BB標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的GP-BB含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

HRG-alpha （Heregulin-alpha） 抗HRGα抗體 0.2ml
HSA（Human sermu albumin） 兔抗人血清白蛋白抗體 0.2ml
Avidin /Gold Avidin—膠體金5nm 0.5ml
NRG1/HRG-β（Heregulin-β） 抗HRGβ抗體 0.2ml
HSTF2/HSF2（Heat Shock Transcription Factor 2） 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.2ml
HSL/LIPE（hormone-sensitive lipase） 荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.1ml
HSL/LIPE（hormone-sensitive lipase） 荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 0.2ml
Hrasls3/HREV107（HRAS like suppressor 3） HRAS樣抑制因子3抗體 0.2ml
HSP-20（Heat Shock Protein 20） 熱休克蛋白-20抗體 0.1ml
Goat anti-Rabbit IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記羊抗兔IgG 0.3ml
Goat anti-mouse IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記羊抗小鼠IgG 0.3ml
HSP-20（Heat Shock Protein 20） 熱休克蛋白-2０抗體 0.2ml
HSP-27（Heat Shock Protein 27） 熱休克蛋白-27抗體 0.1ml
HSP-27（Heat Shock Protein 27） 熱休克蛋白-2７抗體 0.2ml
HSP-60（ Heat shock protein-60） 熱休克蛋白-60抗體 0.1ml
HSP-60（ Heat shock protein-60） 熱休克蛋白-6０抗體 0.2ml
HSP47（ Heat shock protein-47） 熱休克蛋白-47抗體 0.2ml
Rabbit anti-chicken IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗雞IgG（10nm/15nm） 0.5ml
Rabbit anti-chicken IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗雞IgG（10nm/15nm） 1ml
Rabbit anti-chicken IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗雞IgM（10nm/15nm） 2ml
HSP-70 （Heat shock protein-70） 熱休克蛋白-70抗體 0.1ml
HSP-70 （Heat shock protein-70） 熱休克蛋白-7０抗體 0.2ml
HSP75/TRAP-1（Heat Shock Protein 75） 熱休克蛋白-75抗體 0.2ml
HSP-90α（Heat Shock Protein 90α ） 熱休克蛋白90α抗體 0.1ml
HSP-90α（Heat Shock Protein 90α ） 熱休克蛋白9０α抗體 0.2ml
HSP-90β （heat sock protein-90β） 熱休克蛋白-90β 抗體 0.1ml
Rabbit anti-dog IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗狗IgG （10nm/15nm） 2ml
HSP-90β （heat sock protein-90β） 熱休克蛋白-9０β 抗體 0.2ml
HSP-105 （heat sock protein-105） 熱休克蛋白HSP105抗體 0.1ml
HSP-105 （heat sock protein-105） 熱休克蛋白HSP10５抗體 0.2ml
HSPG1/Syndecan-2（heparin sulphateprotoglycans 1） 多配體蛋白聚糖2/硫酸肝素糖蛋白1抗體 0.2ml
HtrA2/Omi（High temperature requirementprotein A 2） 絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶抗體 0.2ml
TRT（omerase catalytic subunit） 端粒酶抗體 0.1ml
Rabbit FITC/Gold 金標(biāo)記兔抗熒光素（10nm/15nm） 2ml
TRT（omerase catalytic subunit） 端粒酶抗體 0.2ml
Human serum 兔抗人血清抗體 0.2ml
Hydroxyethyk starch/HES 130/0.4 羥乙基淀粉抗體 0.2ml
COX10 COX10抗體 0.1ml
COX10 COX10抗體 0.2ml
IAA（Indole-3-Acetic Acid） 吲哚-3-乙酸抗體/植物生長(zhǎng)素抗體 0.1ml
IAA（Indole-3-Acetic Acid） 吲哚-3-乙酸抗體/植物生長(zhǎng)素抗體 0.2ml
API5/AAC11（Apoptosis inhibitor 5） 凋亡抑制因子5抗體 0.2ml
Goat anti-human IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記羊抗人IgG 0.3ml
Goat anti-Rat IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記羊抗大鼠IgG 0.3ml