我們知道，ELSA試劑盒可分為多種類型測(cè)定，是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或的分析技術(shù)。我公司技術(shù)部將名種ELSA試劑盒常用方法的優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)進(jìn)行對(duì)比。

一、直接法

將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的抗體，即可測(cè)定抗原總量，此抗體的特異性非常重要。

1.優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

2.劣勢(shì):試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費(fèi)用相對(duì)提高。

二、間接法:

此測(cè)定方法與直接法類似，差別在于抗體沒有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)抗體來測(cè)定抗原量。

1.優(yōu)勢(shì):二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的抗體則能保留它多的反應(yīng)性,。

2.劣勢(shì):交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。

三、雙抗體夾心法:

被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量;或不標(biāo)記，再透過酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合部位。

1.優(yōu)勢(shì):高靈敏、高專一性，抗原無須事先純化。

2.劣勢(shì):抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

四、竟?fàn)幏?strong style="text-wrap: wrap;">:

樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起竟?fàn)幭嗤目贵w，當(dāng)樣品里的自由抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然，經(jīng)清洗步騾，洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只有固定抗原的對(duì)照組結(jié)果相比較，根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

1.優(yōu)勢(shì):可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

2.劣勢(shì):整體的敏感性和專一性都較差。

五、新ELISA試劑盒技術(shù):

基于細(xì)胞法是一種新的定性蛋白檢測(cè)技術(shù)，將細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng)，待檢測(cè)時(shí)，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接測(cè)量微孔板里蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的變化。

1.優(yōu)勢(shì):無需裂解細(xì)胞，所以目標(biāo)蛋白損失少，可測(cè)定完整細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

2.劣勢(shì):不能測(cè)定抗原量。