人成纖維細胞生長因子23（FGF-23）ELISA試劑盒僅供研究使用

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中人胃蛋白酶原A（PGA）水平。用純化的人胃蛋白酶原A（PGA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的胃蛋白酶原A（PGA）標準品和未知濃度的胃蛋白酶原A（PGA）待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的胃蛋白酶原A（PGA）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人胃蛋白酶原A（PGA）濃度。
試劑盒組成

1
 20倍濃縮洗滌液
 50ml×1瓶
 
 
9
 標準品S1（120μg/L）
 0.5ml×1瓶
 
2
 鏈霉親和素-HRP
 6ml×1瓶
 標準品S2（80μg/L）
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標包被板
 12孔×8條
 標準品S3（40μg/L ）
 0.5ml×1瓶
 
4
 生物素標記的抗-IgG抗體
 6ml×1瓶
 標準品S4（20μg/L ）
 0.5ml×1瓶
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 標準品S5（10μg/L）
 0.5ml×1瓶 
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 10
 密封袋
 1個
 
7
 終止液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 3張
 
8
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 12
 說明書
 1份
 

 
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融

操作步驟
1.       根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
2.       加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3.       配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
5.       加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌：操作同4。

7.       加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8.       洗滌：操作同4。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。

11.   測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．  如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

線形范圍：
5μg/L -150μg/L
規(guī)格：
96人份/盒

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

ELISA試劑盒